药物制剂的微生物学检查电子课件,格式为PPT
1.掌握药物的体外试菌试验方法（琼脂扩散法和系列稀释法），了解药物的体内抗菌实验。
2.掌握一般灭菌制剂的无菌检查方法和原理，熟悉特殊药品的无菌检查法。
3.掌握非灭菌药物的微生物总数测定方法，熟悉药品的大肠杆菌检查方法。
4.了解一般药品的沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和破伤风杆菌的检查方法。
药物的抑菌作用或杀菌作用是在一定条件下相对而言的。在我们检测时，药物的作用受到用药时培养基的组成、温度、PH值及所用的菌种、菌量等各个因素有关。虽然说体外抗菌试验有很多优点，但是由于体外抗菌试验没有复杂的体内因素影响，因此药物体外抗菌试验和体内抗菌试验可能会出现不一致的结果。所以，一般我们在体外对药物进行测试后，有效的药再要进行体内试验，如果体内试验再次证实此药有效的话，才能推荐应用到临床。
第一节 药物的体外抑菌试验
一、药物的体外抑菌试验
（一）体外抑菌试验
药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。
1.稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常用μg∕ml或U/ml表示。具体的液体培养基连续稀释法见书本（P138图8-1），固体培养基连续稀释法，又可分为平板法和斜面法。
2.琼脂扩散法
利用药物在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细菌生长的原理进行的。一般用于细菌和酵母菌的药敏试验。
2.滤纸片法
滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌药物第三性试验、以便选择用药）。滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。
大肠杆菌的检验
供试品→供试液→胆盐乳糖增菌液→麦康凯（MacC）或曙红亚甲基蓝琼脂（EMB）平板，常用的针对大肠杆菌的选择培养基，进行分离培养→纯培养→染色镜检→IMVC试验、乳糖发酵试验→报告结果
金黄色葡萄球菌检验程序
供试品→供试液10 ml→亚碲酸钠肉汤或营养肉汤100 ml增菌培养→卵黄高盐琼脂平板或甘露醇高盐琼脂培养基分离培养（含有高盐作用是抑制革兰氏阴性短杆菌生长，但不影响金黄色葡萄球菌正常生长）→普通肉汤琼脂斜面→革兰染色镜检、金黄色葡萄球菌凝固酶试验→结果报告
沙门菌的检验
供试品→供试液10ml →营养肉汤10ml (37℃，18-24h)→四硫磺酸盐增菌液 ，37℃，24h →分离培养， DHL琼脂(或SS琼脂平板)或EMB琼脂平板(或麦康凯琼脂平板) ，37℃，24h →初步确定试验，TSI琼脂斜面( 37℃，24h )→生化反应（氰化钾试验 赖氨酸脱羧试验 靛基质试验 尿素酶试验等） →血清学试验→ 革兰染色镜检→报告
绿脓杆菌的检验
供试液的制备→增菌培养(胆盐乳糖培养基(B.L)中)→分离培养(培养基为十六烷三甲基-溴化铵或明胶十六烷三甲基-溴化铵) ，在培养基上可见绿脓杆菌绿色淡绿色带荧光的菌落→挑取可疑菌落，接种到营养琼脂斜面上进行纯培养，作进一步检验→染色镜检 G-无芽胞杆菌→生化试验(氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验、42℃生长试验)阳性者可认定为存在绿脓杆菌
破伤风杆菌的检查
供试液的制备→增菌培养(用0.1%葡萄糖疱肉培养基) →分离培养(可疑培养物在血琼脂平板上，厌氧条件下进行培养(破风杆菌菌落呈云雾状蔓延，中心略突，边缘不整齐，周围有β溶血环) →纯培养(0.1%葡萄糖疱肉培养基) →毒力试验(小白鼠后腿内侧肌肉或皮下注射0.3-0.5ml培养基6小时后开始观察→48小时无发病症状，即认为毒力试验阴性。
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